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離心機資訊

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發布時間:2019-04-24 閱讀1666次

　　離心機是生物學教學及科研領域中的常見儀器，離心技術也是分離、制備、純化生物樣品的重要手段。下面小編給大家介紹一下實驗室常用離心法之差速離心法:

　　一、原理

　　差速離心是根據顆粒大小和密度不同造成沉降速度(即沉降系數)的差異，通過分級提高離心轉速或高速與低速離心交替進行，使具有不同質量的顆粒樣品(或大分子)從混合液中分批沉降至管底，從而實現分離目的。

二、適用條件

　　該方法適用于混合樣品中各沉降系數差別較大的組分之間的分離，更準確地說是沉降系數差別在1至幾個數量級的混合樣品的分離，差別越大，分離效果越好。

　　三、使用方法

　　差速離心法一般采用固定角轉子，通過較低速度的離心沉淀，最重的顆粒將全部沉到管底。繼續將上清液以更高的轉速沉淀，即可得到次重的顆粒樣品。逐步增加離心轉速，即可分別得到不同重量的樣品顆粒，以達到分離的目的。

　　通常為了得到較純的顆粒樣品，還需要將沉淀重懸，用相同的轉速再次沉淀。重復幾次之后即可得到大小基本均一的顆粒。

　　但是一般在實際使用中，差速離心通常不用于精細分離，僅用于s值相差1個數量級及以上的2種顆粒的分離，且沉淀不能實現完全回收。

　　四、應用范圍

　　差速離心技術的應用十分普遍，尤其是針對有生物活性物質的分離、粗提和濃縮，例如：

　　動植物病毒

　　各種亞細胞組分(細胞核、葉綠體、線粒體等)

　　核酸

　　蛋白質，等

　　五、應用實例

　　馬鈴薯線粒體的制備

　　取馬鈴薯塊莖200克，加入2.5倍體積的勻漿緩沖液，勻漿后用4層紗布過濾。濾液經4000rpm離心10分鐘 ,收集上清液。

　　上清液13800×g(相對離心力RCF,即重力加速度g的倍數)離心15分鐘收集沉淀，用緩沖液重懸并加入終濃度為15mmol/L的氯化鎂。

　　經DNase I處理后，加入2倍體積的緩沖液，13800×g離心15分鐘收集沉淀，即為線粒體。

　　可成實驗室離心機型號H3-20K就能滿足一般實驗室實驗的需求。

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